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　　　“目前较为成熟的系统已经实现了活细胞内绝大部分重复DNA序列成像和多色成像，甚至在一定程度上实现了非重复DNA序列成像，但它们都存在明显的局限性。”杨良中举例说，比如一些系统，通过改进向导RNA表达质粒的构建方式，将多条向导RNA表达元件放到同一个质粒上，从而减少需要向细胞内递送质粒的数目，增强成像效果。但将多个表达元件构建到一个质粒的方法步骤繁多、操作复杂，并不利于推广使用。还有一些系统，通过将DNA的标记信号放大，实现一条向导RNA对目的序列的标记和成像。但仅利用一条向导RNA可能会存在标记脱靶的问题。

　　　总而言之，在基于CRISPR/dCas9-EGFP的活细胞DNA成像工具中，利用一条向导RNA标记DNA往往信号太弱或容易脱靶，要实现特异性非重复DNA序列成像或多色成像，需要表达多条向导RNA，通过多个靶点DNA信号的富集作用，才能实现对目的非重复序列成像。而如果让每个表达元件只表达一条向导RNA，就会增加向导RNA表达元件的数量，提高成像的复杂度，降低成像效率。“如何高效率、高质量实现非重复DNA序列成像，一直是活细胞DNA成像领域的一大挑战。”杨良中说。

　　　随着能够特异性靶向任意核酸序列的基因编辑系统CRISPR-Cas被开发出来，基于该系统的活细胞DNA成像工具也在不断迭代更新。

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【编辑:程孝先】