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　　　日前，中国科学院分子细胞科学卓越创新中心研究员陈玲玲团队开发了一种活细胞DNA成像新工具。团队筛选并优化了现有的基因编辑系统CRISPR-dCas12a，并基于此构建了新型DNA成像系统CRISPRdelight。这一新工具可用于活细胞内非重复DNA序列成像，为研究活细胞中DNA位点的空间位置和动力学特征提供了更加简单便利的手段。相关研究论文在线发表于《自然・方法》杂志。

　　　“目前较为成熟的系统已经实现了活细胞内绝大部分重复DNA序列成像和多色成像，甚至在一定程度上实现了非重复DNA序列成像，但它们都存在明显的局限性。”杨良中举例说，比如一些系统，通过改进向导RNA表达质粒的构建方式，将多条向导RNA表达元件放到同一个质粒上，从而减少需要向细胞内递送质粒的数目，增强成像效果。但将多个表达元件构建到一个质粒的方法步骤繁多、操作复杂，并不利于推广使用。还有一些系统，通过将DNA的标记信号放大，实现一条向导RNA对目的序列的标记和成像。但仅利用一条向导RNA可能会存在标记脱靶的问题。

活细胞DNA成像是指利用成像手段，对活细胞内的DNA序列进行标记和观察。活细胞DNA成像常用于检测基因组DNA在细胞核内的定位分布和动态变日韩水澄日逼毛片化等特征，帮助人们了解这些特征与基因表达调控之间的关系，加深人们在基因组层面对细胞生命活动的认识。在医疗领域，活细胞DNA成像可以用来检测细胞内基因组DNA的拷贝数，有助于21-三体综合征等染色体异常相关疾病的诊断。

　　　总而言之，在基于CRISPR/dCas9-EGFP的活细胞DNA成像工具中，利用一条向导RNA标记DNA往往信号太弱或容易脱靶，要实现特异性非重复DNA序列成像或多色成像，需要表达多条向导RNA，通过多个靶点DNA信号的富集作用，才能实现对目的非重复序列成像。而如果让每个表达元件只表达一条向导RNA，就会增加向导RNA表达元件的数量，提高成像的复杂度，降低成像效率。“如何高效率、高质量实现非重复DNA序列成像，一直是活细胞DNA成像领域的一大挑战。”杨良中说。

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【编辑:孙天民】