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   例如上海科技大学研究员马涵慧开发了DNA成像系统CRISPRainbow和CRISPR-Sirius,用于在活细胞中观察基因组的三维结构,并示踪它们的动态变化。前者创造性地在向导RNA骨架结构中引入了RNA适配体,用于标记DNA序列,并通过改变RNA适配体的类别,实现了不同DNA靶点的多色成像。后者则在此基础上进一步做了优化,通过增加RNA适配体的数目来提高成像质量。北京大学教授陈匡时团队开发的两种DNA成像系统,则通过引入分子信标和荧光共振能量转移成像方法来提高DNA成像信噪比,以提升成像清晰度。

   由于新系统具有简便易操作等特点,杨良中认为,该系统未来有望应用于需要进行活细胞DNA成像的实验室,为活细胞中基因组DNA转录活性、DNA在细胞核内的定位分布和动态变化特征之间的关联性,以及等位基因之间表达调控的异质性等研究提供助力,还能进一步帮助研究人员了解三维基因组在细胞核内高度组织化的分子机制及其功能意义等。

   随着能够特异性靶向任意核酸序列的基因编辑系统CRISPR-Cas被开发出来,基于该系统的活细胞DNA成像工具也在不断迭代更新。

   “当前,活细胞DNA成像工具的种类已经十分丰富。”论文第一作者、中国科学院分子细胞科学卓越创新中心博士杨良中介绍,其中大部分工具都是从CRISPR/dCas9-EGFP(EGPF是一种荧光蛋白质)系统衍生而来。这些已有的活细胞DNA成像工具分别从向导RNA的骨架结构和表达质粒构建方式等方面,对原始系统进行优化升级。

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【编辑:关玉和】

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