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   “当前,活细胞DNA成像工具的种类已经十分丰富。”论文第一作者、中国科学院分子细胞科学卓越创新中心博士杨良中介绍,其中大部分工具都是从CRISPR/dCas9-EGFP(EGPF是一种荧光蛋白质)系统衍生而来。这些已有的活细胞DNA成像工具分别从向导RNA的骨架结构和表达质粒构建方式等方面,对原始系统进行优化升级。

   与基于CRISPR/dCas9-EGFP的活细胞DNA成像工具不同,此次团队开发的新工具是基于基因编辑系统CRISPR-dCas12a。这两种系统都可以特异性靶向DNA,但CRISPR-dCas12a还能够加工处理系统本身的CRISPR阵列,并生成成熟的向导RNA。

活细胞DNA成像是指利用成像手段,对活细胞内的DNA序列进行标记和观察。活细胞DNA成像常用于检测基因组DNA在细胞核内的定位分布和动态变日本人妻中字色色网化等特征,帮助人们了解这些特征与基因表达调控之间的关系,加深人们在基因组层面对细胞生命活动的认识。在医疗领域,活细胞DNA成像可以用来检测细胞内基因组DNA的拷贝数,有助于21-三体综合征等染色体异常相关疾病的诊断。

   总而言之,在基于CRISPR/dCas9-EGFP的活细胞DNA成像工具中,利用一条向导RNA标记DNA往往信号太弱或容易脱靶,要实现特异性非重复DNA序列成像或多色成像,需要表达多条向导RNA,通过多个靶点DNA信号的富集作用,才能实现对目的非重复序列成像。而如果让每个表达元件只表达一条向导RNA,就会增加向导RNA表达元件的数量,提高成像的复杂度,降低成像效率。“如何高效率、高质量实现非重复DNA序列成像,一直是活细胞DNA成像领域的一大挑战。”杨良中说。

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【编辑:胡宝善】

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